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2024年12月，南京医科大学李晶等团队在Journal of Extracellular Vesicles（IF=15.5）上发表了“Distinct molecular properties and functions of small EV subpopulations isolated from human umbilical cord MSCs using tangential flow filtration combined with size exclusion chromatography”的研究论文。该论文提供了一种切向流过滤（TFF）结合尺寸排阻色谱（SEC）的方法来大规模分离和纯化源自人脐带间充质干细胞（HucMSCs）的sEVs亚群。S1-sEVs和S2-sEVs在大小、膜标记蛋白和携带物方面表现出稳定的变化，通过体外实验和动物疾病模型，研究人员验证了S1-sEVs和S2-sEVs的不同功能。S1-sEVs表现出更强的免疫调节作用，而S2-sEVs则在促进细胞增殖和血管生成方面表现出更强的能力。这种方法为针对不同MSCs适应症的靶向治疗干预提供了可能。拜谱生态学为该研究提供了蛋白质组学拜谱生物。
用英文怎么说题头：Distinct molecular properties and functions of small EV subpopulations isolated from human umbilical cord MSCs using tangential flow filtration combined with size exclusion chromatography
先生发表杂志期刊：Journal of Extracellular Vesicles
关系细胞：15.5
发布事件：2024.12.7
小说拜谱生物院校：南京医科大学
组学技术水平：miRNA测序、球蛋白组学（拜谱动物给出）
调查涂料：外泌体
探讨路经：
一、深入分析成果
01、能够将TFF与SEC系统相组合来提取sEVs亚群和HucMSCs
为了能够进行是和临床药学应用软件的MSC-sEVs的大经营规模制造，做者按照好几个种将TFF与SEC相紧密联系的方案，从HucMSCs的状况塑造培养液中分发型离和纯化sEVs。能够 血清质印痕、NTA进行分析、纳流上皮细胞术的但是呈现隔离的两位峰很有可能代表英文了sEVs的两位不一亚群。做者将相对应的于这两位峰峰值的sEVs亚群分别为起名为S1-sEVs和S2-sEVs（图1）。
图1：TFF紧密联系SEC设备从HucMSCs中离和分析方法sEVs亚群
02、MSC-sEVs亚群的研究方法
sEVs标志物的差异表达意味着它们可能具有不同的内容或功能。为了表征MSC-sEVs亚群的异质性，首先使用蛋白酶组学分析。总共在S1和S2-sEVs亚群中分别鉴定出1326和1246个蛋白质，其中447个蛋白质在S1-sEVs中高度表达，127个蛋白质在S2-sEVs中富集（图2a）。KEGG分析表明，蛋白酶体途径是S1-sEVs富集蛋白中最富集的通路，而代谢途径在S2-sEVs中显示出最高水平的富集（图2b）。除此之外，还发现S1-sEVs中生长因子受体的富集，例如表皮生长因子受体（EGFR）、肝细胞生长因子受体（HGFR）、成纤维细胞生长因子受体1（FGFR1）等。然而，在S2-sEVs中，枢纽蛋白与代谢、糖酵解和缺氧诱导因子1（HIF-1）信号通路密切相关（图2c-h）。这说明了S1-sEVs和S2-sEVs在靶细胞活动的调节中可能具有不同的作用。
图2：的两个sEVs亚群的蛋白酶质组学概述
为了探索sEVs亚群中的其他分子，作者进行了miRNA测序，并在S1-sEVs和S2-sEVs中分别鉴定了173和79个miRNA两个sEVs亚群之间的差异表达miRNA，其中在S1-sEVs中发现了113个独特的miRNA，而在S2-sEVs中仅发现了19个miRNA（图3a-b）。通过qRT-PCR验证了在S1-sEVs或S2-sEVs中富集的代表性miRNA，包括let-7b-5p、miR-155-5p、let-7c-5p、miR-9-5p和miR-30d-5p（图3c-g）。在S1-sEVs中，核心节点靶基因包括酪氨酸3-单加氧酶/色氨酸5-单加氧酶激活蛋白zeta（YWHAZ）、BTB结构域和CNC同源物1（BACH1）、丛蛋白D1（PLXND1）、高迁移率组AT-hook1（HMGA1）、SMAD家族成员2（SMAD2）、IL6、IL6R 和转化生长因子β受体1（TGFBR1).在S2-sEVs中，核心节点靶基因被鉴定为PR/SET结构域1（PRDM1）、细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1A（CDKN1A）、原纤维蛋白2（FBN2）、Notch受体1（NOTCH1）、KLF转录因子6（KLF6）和贝克蛋白1（BECN1）。GO分析显示S1-sEVs组靶基因中与细胞内蛋白质转运、染色质或组蛋白修饰相关的丰富生物过程，而S2-sEVs组靶基因中富含细胞增殖或代谢相关生物过程的负调控（图3h-j）。KEGG通路分析，发现S1-sEVs的miRNAs靶基因在与RNA转运或贴壁连接等相关的信号通路中更富集，而S2-sEVs中的miRNAs靶基因在丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）和Wingless/Integrated（WNT）信号通路中更富集（图3k）。
图3：两sEVs亚群的miRNA谱
03、S1-sEVs和S2-sEVs对体神经元分裂繁殖和巨噬体神经元极化的区别宏观调控
应用于两sEVs亚群的不相同带着物构成，深入分析进一个步骤分用八种不相同使用量的S1-sEVs或S2-sEVs塑造培养3T3癌上皮神经细胞膜、用脂多糖（LPS）办理小鼠骨髓渠道的巨噬癌上皮神经细胞膜（BMDMs）。最终显示S1-sEVs和S2-sEVs对癌上皮神经细胞膜生长的和瓦解带宽现象出不相同的后果，或者对巨噬癌上皮神经细胞膜极化的功能来源于对比（图4a-p）。
图4：S1-sEVs和S2-sEVs对細胞增值和巨噬細胞极化的文化差异宏观调控
04、S1-sEVs和S2-sEVs前边肢梗死中的性别差异调低
MSC以及其衍化的sEVs使用促使新血液的构成朝后肢脑供血不足的治疗中被范围广新闻稿件，为了能观察动物S1-sEVs和S2-sEVs对血液转化和脑供血不足组织结构复苏的影响到，使用单边股冠状动脉结扎搭建了小鼠后肢脑供血不足三维模型。没想到呈现与S1-sEVs比起，S2-sEVs表面出好的促血液转化属性，出现脑供血不足帮助破损后后肢很快已经修复手机和复苏（图5a-o）。
图5：S1-sEVs和S2-sEVs对后肢脑供血不足的多种诊疗体验
05、S1-sEVs和S2-sEVs在皮夫手术伤口结疤中的效用
MSC还有其具象化的sEV而致在介入手术、手术创伤面积比较小、烧伤或高血压症状进而引发的皮肤吧吧组织刀口患处结痂消退中的意义而被广泛的探讨。要想观测离心分离的sEVs亚群对皮肤吧吧组织刀口患处结痂消退的损害，本探讨创立一个多个具备深部2度烧伤的大鼠建模方法。后果证实S2-sEVs使用对糖酵解的正面损害对皮肤吧吧组织刀口患处结痂消退表达出是非常好处的损害（图6a-p）。
图6：S1-sEVs和S2-sEVs对皮夫创伤俞合的有差异 应响
06、S1-sEVs和S2-sEVs对DSS诱骗的小肠炎的各种不同中药治疗结果
我们察觉到S1-sEVs和S2-sEVs对巨噬内部电性的地域差异可以调低后会，仍在在小鼠小肠炎沙盘模型中开展它们的的免疫系统可以调低技能。然而具体分析了S1-sEVs冶疗DSS介导的小肠炎的特男人（图7a-s）。
图7：S1-sEVs和S2-sEVs对肤质手术伤口消退的有差异损害
07、sEVs几个亚群中菌物遭受的一定的差异调节管控
ESCRT根据性经过和非ESCRT性经过都指引sEV的生物学技术形成。在一项研究分析中，作著发展了sEVs符号物在S1-sEVs和S2-sEVs中的差距展现。EGFR是經典内吞经过中已建立起的HGS底物，虽然在S1-sEVs和S2-sEVs中就能够关注到EGF淀粉酶，但在S1-sEVs中EGFR泛素化平均水平要高得多，HGS在将泛素化产品引领到S1-sEVs中起关键点反应，实现整合HGS敲除人体细胞系发展HGS的短缺分析S1-sEVs的生物学技术形成明显限制，但对S2-sEVs的造成基本上未反应，呈现S1-sEVs和S2-sEVs实现各种不同的调准机制化排泄，不同被称作ESCRT根据性和ESCRT非根据性经过（图8a-t）。
图8：sEVs的5个亚群期间菌物发生的的地域差异调
二、原创文章总结ppt
本研究使用TFF和SEC从人MSC中分离的两个sEV亚群在大小、膜标志物或携带物上表现出差异，并探究不同的sEVs亚群代表了MSCs的不同生物学功能。利用蛋白酶组学，miRNA测序及基因敲除，模型构建等分子生物学实验表明了高度表达CD9、HRS和GPC1的S1-sEVs表现出更大的免疫调节作用，而富含CD63和FLOT1/2表达的S2-sEVs在促进细胞增殖和血管生成方面具有增强的能力。这些差异归因于它们包含的特定蛋白质和miRNA。进一步研究显示，两个不同的sEVs亚群对应于不同的生物过程：ESCRT通路（S1-sEVs）和以脂质筏（S2-sEVs）为代表的ESCRT非依赖性通路（图9）。这种方法可能为各种MSC适应症的靶向治疗干预提供优势。
图9：sEVs亚群的生物工程合并忽略于其他的体细胞内方式
三、拜谱个人心得体会
该研究使用TFF-SEC系统从人脐带间充质干细胞中规模化生产不同的sEVs亚群，并且鉴定和表征了两种不同的sEVs亚群，S1-sEVs和S2-sEVs，它们在生物发生、特征和携带物含量方面有所不同。这些差异导致了它们生物学功能的变化。虽然MSC衍生的SEV因其临床潜力而备受关注，但该研究引入了一个新概念，即利用这些不同的MSC sEVs亚群对特定疾病进行靶向治疗。拜谱生物为该研究提供了血清组学检测分析服务，拜谱生物可提供完善成熟的转录组学、蛋白组学、代谢组学以及多组学联合产品技术服务体系，助力发表高分文献，欢迎致电咨询！
参考资料论文参考文献：
LiuW, Wang X, Chen Y, Yuan J, Zhang H, Jin X, Jiang Y, Cao J, Wang Z, Yang S, Wang B, Wu T, Li J. Distinct molecular properties and functions of small EV subpopulations isolated from human umbilical cord MSCs using tangential flow filtration combined with size exclusion chromatography. J Extracell Vesicles. 2025 Jan;14(1):e70029. doi: 10.1002/jev2.70029. PMID: 39783889; PMCID: PMC11714183
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